蜀科離心機(jī)在中藥研究中的應(yīng)用

摘要：研究丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組合物（組合物）在斑馬魚體內(nèi)的代謝，探討斑馬魚用于中藥多組分代謝研究的可行性及合理性。

方法

2.1分組與給藥

取斑馬魚成魚，平均分成2組，每組5條，分別置于30 mL含有1% DMSO純凈水（空白魚組）、含丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組合物（丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I質(zhì)量濃度分別為1.57、1.02、2.09μg/mL）的1% DMSO純凈水溶液（給藥魚組）棕色瓶中，同時(shí)設(shè)空白藥物組（組合物1% DMSO純凈水溶液）。

2.2樣品采集與處理

給藥魚組分別于斑馬魚暴露藥液后0、1、2、4、6、8、12、18、24 h取藥液4 mL各2份，24 h將魚取出，用純凈水迅速洗滌3次，殺掉，去除魚鰭和魚磷，稱質(zhì)量，于−70 ℃冰箱放置。各時(shí)間點(diǎn)斑馬魚藥液各2份分別混合，于−70 ℃冰箱放置。空白藥物組于斑馬魚暴露藥液后0、24 h時(shí)同法取樣。將不同時(shí)間點(diǎn)取出的斑馬魚藥液冷凍干燥，殘?jiān)?.5 mL甲醇溶解，過(guò)0.22 μm濾膜，濾液20 μL進(jìn)行HPLC-MS分析。取24 h空白魚組和給藥魚組斑馬魚，混合，剪碎，稱取1 g，加5 mL生理鹽水勻漿，用蜀科高速冷凍離心機(jī)3 500 r/min離心10 min，上清液用等體積醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)? mL甲醇溶解制成1 g/mL的溶液，過(guò)0.22 μm濾膜，濾液20 μL進(jìn)行HPLC-MS分析。

結(jié)果

組合物經(jīng)斑馬魚作用后，產(chǎn)生丹參酮IIA和隱丹參酮的羥基化和脫氫產(chǎn)物，未發(fā)現(xiàn)丹參酮I的代謝產(chǎn)物。

結(jié)論

斑馬魚對(duì)組合物的代謝與大鼠或鼠肝微粒體的代謝機(jī)制高度一致，提示斑馬魚對(duì)該組合物的代謝具合理性，且具有化合物用量少、成本低、簡(jiǎn)單、等優(yōu)點(diǎn)，為斑馬魚用于復(fù)雜的中藥體系代謝研究提供依據(jù)。

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